美国非链Uncle/Unit

一、Uncle高通量多参数蛋白稳定性分析仪

Uncle 革命性的整合了 3 种不同的检测模式:荧光、静态光散射 SLS 和动态光散射 DLS,提供 11 种特色 的应用及组合。用更少的样品,在短短几个小时得到所需的数据。

  • 溶解温度(Tm)&聚集温度(Tagg)
  • 检测 Tm(DSF 法)
  • △G(2~4 state △G 分析)
  • 等温稳定性实验
  • 热恢复实验
  • 颗粒大小&多分散性
  • 颗粒升温实验
  • B22/KD/黏度/G22/符合 21CFR Part II

                                             

产品参数

应用

全光谱荧光

静态光散射 (SLS)

动态光散射 (DLS)

Tm

Tagg

采用 SYPRO(DSF 法)检测 Tm

ΔG

等温稳定性实验

热恢复实验

颗粒大小 & 多分散性

粒径随温度变化

B22/G22/KD /黏度

仪器

最小样品量

9μL, 样品池密封

测试样品数量/实验

48

样品温度范围

15–95℃

最小样品浓度

0.05 mg/mL – 150 mg/mL IgG (与蛋白种类相关)

加热速率

0.01–10 ℃/minute

控温精度

±1℃ (<70℃), ±1.5℃ (>70℃)

荧光和静态光散射

样品精度

<2 % CV (Tm)

SLS 分辨率

~15 kDa 平均分子量的改变

激发

266 nm, 473 nm 激光

检测

荧光:250-720 nm 全光谱 CCD 检测器;SLS:266 nm 和 473 nm 光强检测器

动态光散射

流体力学直径范围

0.3–1000 nm

大小准度

± 2 %

最小样品浓度

0.1 mg/mL –溶菌酶

分子量范围

192 Da – 25 MDa

光源

660 nm 激光二极管

检测

雪崩光电二极管



二、Unit高通量蛋白稳定性分析仪

Unit 同比其他测定蛋白稳定性参数的设备相比,需要的样品量更低。基于客户所了解的蛋白结构和稳 定性知识,2 小时内同时可以得到熔解温度和聚集温度 (Tm & Tagg),是蛋白稳定性筛选最好的平台。
  • Tm 和 Tagg 温 度
  • 9 μL(0.5μg) 样品量
  • 全密封样品
  • 全光谱荧光和静态光散射
  • 无标记技术,6 种应用
  • 可选择基于蛋白染料的应用
  • Tm(DSF 法)

产品参数

应用

Unit

375nm

445nm

Tm

Tagg

△G

热恢复实验

等温恒定实验

粘度

膜蛋白稳定性

Tm(DSF 法)


描述

规格

最小样品量

9μL,样品池密封

测试样品数量/实验

48

加热速率

0.01—10℃/minute

最小样品浓度

0.05 mg/mL—150 mg/mL lgG(与蛋白种类相关)

样品精度

< 2% CV (Tm)

SLS 分辨率

~15 kDa 平均分子量的改变

检测

荧光:250—720 nm 全光谱 CCD 检测器;

样品温度范围

15—95℃

控温精度

±1℃(<70℃),±1.5℃(>70℃)

环境要求

温度范围:18—28℃

湿度:40—60 相对湿度(不结霜)

物理性质

54cm 宽×50cm 深×58cm 高,50kg

电源

自动切换电源,电压 110—240V AC,50—60Hz,6A 防喘振保险丝,最大功 率 600W


三、利用Uncle/Unit发表的文献

高通量多功能蛋白稳定性分析仪Unit/Uncle,是得到蛋白分子结构稳定性、聚集稳定性、胶体分散稳定性等多种类型数据的设备。该设备既能使用经典方法处理数据,又新增多种分析模式;既可获得单一类型数据,又可对多种类型数据同时测定整合分析;既保证了数据质量,又实现了数据种类和通量;并且样品用量少,操作简单快捷,更能够解决蛋白样品数据获得过程中的问题。以此近期多篇利用该设备得到的实验结果高质量文献发表。

1、2017年,James I. Austerberry 等利用Unchained蛋白稳定性分析仪Unit/Uncle在European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 上发表题为The Effect of Charge Mutations on the Stability and Aggregation of a Human Single Chain Fv Fragment的文章。该研究发现,尽管发生了精氨酸或赖氨酸富集的突变体都会发生相似的蛋白间的天然交联,但聚集趋势会因前者的富集增强,因后者减弱,这为证明赖氨酸在一定条件下可抑制部分折叠的位点间的互作提供了证据。过充突变体遵循已有的基础蛋白在酸性环境下的规律,即过量的净电荷会降低结构稳定性,增加成核速率,但相反地,由于分子间电荷斥力增加,会减小了聚集体增长速率。该结果果突出了使用构象稳定性和天然态蛋白间相互作用作为聚集特性预测指标的局限性,并为如何构建稳定的荷电突变提供了指导。

2、2017年,Josefine Morgenstern等利用Unchained蛋白稳定性分析仪Unit/Uncle在International Journal of Pharmaceutics上发表题为Effect of PEG Molecular Weight and PEGylation Degree on the Physical Stability of PEGylated Lysozyme PEG的文章。在制药、生物技术应用时,生产、纯化、配制和储存蛋白过程中所面对的溶液条件是不利于其稳定的。这些有害的条件包括极端的pH值变化,高离子浓度或高温。这些促进蛋白质构象和聚集状态发生非预想变化的主要影响因素的表征,以及对蛋白质稳定性的操纵和选择性控制对生物制药的研究和过程的发展至关重要。在这种情况下,聚乙二醇(PEG)以共价键连接到蛋白质是一种有价值的改善蛋白质物理化学性质的策略。本文研究了聚乙二醇分子量和聚乙二醇化度对聚乙二醇溶菌酶物理稳定性的影响。并通过对溶菌酶进行聚乙二醇处理,使蛋白质的溶解度增加了11倍以上。

3、2016年Kai Baumgartner等利用Unchained蛋白稳定性分析仪Unit/Uncle在Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 上发表题为Prediction of Salt Effects on Protein Phase Behavior by HIC Retention and Thermal Stability 的文章。在生物制药业,了解和确保每个步骤中正确的蛋白相状态被作为关键质量属性。不需要的蛋白质沉淀或结晶会导致柱、管或过滤器堵塞。在配方中,当注射到病人体内时,聚集物的形成甚至是致命的。典型的说明蛋白质性状的方法是蛋白质相图的产生。通常,蛋白质相行为依赖于蛋白质和沉淀剂浓度。尽管使用高通量的方法来生成相图,但是达到平衡所需的时间是瓶颈。现有一种更快的方法来预测蛋白质相行为。在这项研究中,疏水相互作用色谱滞留时间与晶体大小和形式相关。使用OpTIM®2系统的高通量热稳定性测量值(融化和聚集温度)成功地与葡萄糖异构酶稳定性关联上了。通过疏水相互作用色谱和热稳定性测定,成功地预测了不同盐在特定pH范围内的葡萄糖异构酶构象和胶体稳定性。

4、 2016年,Robbert Q. Kim 等利用Unchained蛋白稳定性分析仪Unit/Uncle在Journal of Structural Biology上发表题为Structure of USP7 Catalytic Domain and Three Ubl-domains Reveals a Connector α-helix with Regulatory Role USP7的文章。泛素化是细胞途径中的一个重要信号,通过降解、重定位或络合物形成改变目标蛋白的命运。这些信号通过去泛素化酶(DUBs)来平衡,去泛素化与特定蛋白的泛素化过程相反。因为泛素化途径是至关重要的,所以DUB的活性通常被严密控制。USP7是一个表达量非常高的DUB,具有多重靶点,在包括DNA调控、p53应激反应和体内蛋白回收等不同的途径中扮演多种角色。全长的USP7在非活动状态和活动状态之间进行切换,通过定位在c端HUBL域中的5个Ubl折叠进行调整。活性态需要最后两个Ubls (USP745)和催化域(USP7CD)之间的相互作用,这可以通过与GMPS相互作用的USP7 (USP7123)的前三个Ubl域的变构相互作用来促进。本文研究了USP7状态之间的转换。提供了USP7CD123的晶体结构,并表明CD和Ubl123通过一个扩展的带电荷的螺旋连接在一起。使用突变分析来确定这种“连接螺旋”的电荷和刚度对于完整的USP7活性是否重要。




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